CHYMOTRYPSINChymotrypsinum Chymotry

CHYMOTRYPSIN
Chymotrypsinum
 
Chymotrypsin là men thủy phân protein được kết tinh từ dịch chiết tuyến tụy bò, Bos taurus Linné (Fam Bovidae). Chế phẩm phải chứa không ít hơn 1000 đơn vị chymotrypsin trong mỗi mg, tính theo chế phẩm đã làm khô và phải chứa từ 90,0 đến 110,0% so với hoạt lực ghi trên nhãn.
Tính chất
Bột kết tinh hoặc bột vô định hình màu trắng. Hơi tan trong nước. Dạng bột vô định hình dễ hút ẩm
Định tính
A. Lấy khoảng 10 mg chế phẩm, hòa tan trong 10 ml nước đun sôi để nguội. Lấy 0,05 ml dung dịch thu được cho vào khay sứ trắng, thêm 0,2 ml dung dịch cơ chất. Màu đỏ tía xuất hiện trong vòng 3 phút. 
Cách pha dung dịch cơ chất:
Dung dịch đỏ methyl - xanh methylen: Trộn đồng thể tích dung dịch đỏ methyl 0,1% trong ethanol 96% (TT) và dung dịch xanh methylen 0,05% trong ethanol 96% (TT).
Dung dịch cơ chất: Cân chính xác 237,0 mg N-acetyl-L-tyrosin ethyl ester cho vào bình định mức 100 ml, thêm 2 ml ethanol 96% (TT), lắc đến khi tan. Thêm 20 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,0 (chuẩn bị trong phần định lượng), thêm 1 ml dung dịch đỏ methyl - xanh methylen  rồi pha loãng với nước vừa đủ đến vạch.
B. Lấy khoảng 30 mg chế phẩm hòa tan trong dung dịch acid hydrocloric 0,001 N (TT), pha loãng thành 100 ml với cùng dung môi. Phổ hấp thụ tử ngoại (附录4.1Phụ lục 4,1) của dung dịch thu được trong khoảng bước sóng từ 220 đến 320 nm phải có cực đại ở bước sóng khoảng 281 nm và cực tiểu  ở bước sóng khoảng 250 nm.
Mất khối lượng do làm khô
Không được quá 5,0% (Phụ lục 9.6)
(0,100 g; 60 oC; trong chân không; 4 giờ)
Tro sulfat
Không được quá 2,5% (Phụ lục 9.9; phương pháp 2)
Dùng 0,100 g chế phẩm.
Trypsin
Không được quá 1% (kl/kl).
Dung dịch thử: Hòa tan 100 mg chế phẩm trong 10,0 ml nước.
Dung dịch đối chiếu: Dung dịch Trypsin (ĐC) trong nước có nồng độ 0,01%.
Dung dịch đệm Tris(hydroxymethyl)aminomethan pH 8,1(0,08 M): Hòa tan 294 mg calci clorid (TT) trong 40 ml dung dịch tris(hydroxymethyl)aminomethan 0,20 M, điều chỉnh pH đến 8,1 bằng dung dịch acid hydrocloric 1 N (TT) và pha loãng thành 100 ml với nước.
Dung dịch cơ chất: Cân 98,5 mg p-toluensulfonyl-L-arginin methyl ester hydroclorid (TT) (loại dùng để định lượng trypsin), cho vào bình định mức dung tích 25 ml. Thêm 5 ml dung dịch đệm tris(hydroxymethyl)aminomethan pH 8,1 và lắc cho đến khi hòa tan cơ chất. Thêm 0,25 ml dung dịch đỏ methyl - xanh methylen (pha ở phần định tính) và thêm nước vừa đủ đến vạch.
Cách tiến hành:
Dùng micro pipet lấy 50 µl dung dịch thử và dung dịch đối chiếu cho vào hai khay sứ trắng riêng biệt, thêm 0,2 ml dung dịch cơ chất vào mỗi dung dịch. Trong vòng 3 phút, khay sứ chứa dung dịch thử không được có màu đỏ tía tạo thành, khay sứ chứa dung dịch đối chiếu cho màu đỏ tía.
Định lượng
Dung dịch đệm phosphat pH 7,0 (0,067 M): Hòa tan 4,54 g kali dihydrophosphat (TT) trong 500 ml nước (dung dịch A). Hòa tan 4,73 g dinatri hydrophosphat khan (TT) trong 500 ml nước (dung dịch B). Trộn 38,9 ml dung dịch A với 61,1 ml dung dịch B. Điều chỉnh tới pH 7,0 bằng cách thêm từng giọt dung dịch B nếu cần.
Dung dịch cơ chất: Hòa tan 23,7 mg N-acetyl-L-tyrosin ethyl ester (TT) (loại thích hợp để dùng định lượng chymotrypsin) trong khoảng 50 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,0 bằng cách làm ấm. Để nguội, thêm dung dịch đệm phosphat pH 7,0 vừa đủ 100 ml. 
Lưu ý: Có thể bảo quản đông lạnh dung dịch cơ chất và được sử dụng sau khi rã đông, nhưng phải làm đông lạnh ngay sau khi pha.
Dung dịch thử: Cân chính xác một lượng chế phẩm thích hợp (W) và hòa tan trong dung dịch acid hydrocloric 0,0012 N để thu được dung dịch có nồng độ từ 12 - 16 đơn vị chymotrypsin trong 1 ml. Dùng dung dịch có nồng độ thấp hơn hoặc cao hơn nếu cần sao cho trong quá trình định lượng sự thay đổi độ hấp thụ trong khoảng từ 0,008 – 0,012 trong mỗi 30 giây. 
Cách tiến hành:
Định lượng bằng máy quang phổ tử ngọai thích hợp, có hệ thống điều nhiệt để duy trì nhiệt độ buồng chứa cốc đo ở 25 ± 0,1oC. Xác định nhiệt độ trong cốc đo trước và sau khi đo độ hấp thụ để đảm bảo nhiệt độ không thay đổi quá 0,5 oC.
Hút chính xác 0,2 ml dung dịch acid hydrocloric 0,0012 N  và 3,0 ml dung dịch cơ chất vào cốc đo dày 1 cm. Đặt cốc đo vào máy quang phổ tử ngoại và điều chỉnh thiết bị để có độ hấp thụ là 0,200 ở 237 nm.
Hút chính xác 0,2 ml dung dịch thử cho vào cốc đo dày 1 cm, thêm chính xác 3,0 ml dung dịch cơ chất, trộn đều. Đặt cốc đo vào máy quang phổ tử ngoại và đo ngay độ hấp thụ. 
Đo độ hấp thụ sau mỗi 30 giây trong ít nhất 5 phút. Lặp lại thí nghiệm cùng độ pha loãng ít nhất một lần. Giá trị tuyệt đối của độ hấp thụ không quan trọng bằng tốc độ suy giảm hằng định của độ hấp thụ. Nếu tốc độ suy giảm của độ hấp thụ không đạt được hằng định trong khoảng thời gian ít nhất là 3 phút, phải làm lại thí nghiệm, nếu cần sử dụng dung dịch thử có nồng độ thích hợp. 
Vẽ đường biểu diễn độ hấp thụ theo thời gian, lấy giá trị độ hấp thụ làm tung độ và thời gian làm hoành độ. Chọn đoạn tuyến tính trong vòng 3 phút để xác định hoạt lực của mẫu thử.
Một đơn vị chymotrypsin là hoạt tính làm thay đổi độ hấp thụ là 0,0075 trong mỗi phút với các điều kiện quy định của phương pháp định lượng này.
Tính hoạt lực (đơn vị) chymotrypsin có trong mỗi mg chế phẩm theo công thức:


 
 
 
 

Trong đó: 
A1 : Độ hấp thụ ở thời điểm đầu trong khoảng biến thiên độ hấp thụ tuyến tính,
A2 : Độ hấp thụ ở thời điểm cuối trong khoảng biến thiên độ hấp thụ tuyến tính,
T   : Khoảng thời gian giữa lần đọc đầu và lần đọc cuối (phút),
D  : Độ pha loãng của dung dịch thử,
W : Khối lượng mẫu thử (mg),
Giới hạn nhiễm khuẩn
Không được có Pseudomonas aeruginosa, các chủng Salmonella và Staphylococcus aureus (附录13.6Phụ lục 13.6).
Bảo quản
Trong bao bì kín, để nơi khô mát, tránh ánh sáng.
Loại thuốc
Thuốc men thủy phân protein.

結果 (中文) 1:

糜蛋白酶Chymotrypsinum 糜蛋白酶是从胰腺提取牛，Bos 金牛座的蛋白水解酶 Linné (Fam 牛科)。产品必须包含不小于 1000年单位的胰凝乳蛋白酶在每毫克，计算的筹备工作已经干，并且必须包含 90.0 到标签上所标明的有功功率 110.0%。性质结晶性粉末或无定形白色粉末。微溶于水。非晶粉末容易干燥剂默认A.检索 10 毫克左右，溶解于 10 毫升烧开的水来冷却。得到解的白瓷托盘，在添加 0.2 毫升的水有机物 0.05 毫升。紫颜色 》 出现在 3 分钟内。如何搭配的流体力学的解决方案:甲基红溶液亚蓝: 铜搅拌机量 0.1%甲基红乙醇溶液中的 96%(TT) 和亚蓝 0.05%溶液中乙醇 96%(TT)。流体力学解决方案: 权衡到底 237.0 毫克 N 还原 acetyl CoA-L-酪氨酸乙酯添加到瓶 100 毫升，加 2 ml 的乙醇 96%(TT)、 摇动直到融化。添加 20 毫升的磷酸缓冲溶液 ph 值为 7.0 (准备在定量部分)、 添加 1 毫升的红-亚甲基蓝溶液，然后加水稀释足以素描。B.采取大约 30 毫克的水溶性制剂在 0.001 N hydrocloric 酸溶液 (TT)，稀释到 100 毫升，用相同的溶剂。紫外吸收光谱 (附录附录 4.1 4.1) 的解在波长范围从 220 到 320 毫微米必须有最大值约 281 nm 和波长约 250 毫微米。由于干燥失重不要太 5.0%(附件 9.6)(0.100 g; 60 oC; 在真空中进行; 4 个小时)硫酸灰分不要太 2.5%(附录 9.9; 方法 2)使用 0.100 g 产品。胰蛋白酶不超过 1%(kl 援框架)。解决方案: 溶制剂在 10.0 毫升的水 100 毫克。水的引用: 在水浓度 0.01%的胰蛋白酶 (DC) 解决方案。缓冲溶液三 (羟甲基) aminomethan pH 8.1 (0.08 M): 294 毫克的钙 clorid (TT) 溶于 40 毫升的解决方案三 (羟甲基) aminomethan 0.20 M，调节 pH 至 8.1 hydrocloric 酸 1 N (TT)，稀释到 100 毫升水。体液: 重量 98.5 mg p-toluensulfonyl-L-arginin 用盐酸甲酯 (TT) (那种用于量化胰蛋白酶)，卷的烧瓶，25 毫升。 添加 5 毫升的缓冲溶液的三 (羟甲基) aminomethan ph 值 8.1 的摇动直到溶解的有机物质。添加 0.25 毫升的甲基红溶液亚蓝 (水晶在定性部分) 和添加到起始行的只是足够的水。如何继续:利用微吸管检索 50 µ l 水溶液和测试工程师为两个单独的白瓷盘，每个解决方案中加入 0.2 毫升的水的有机化合物。在 3 分钟内，瓷托盘包含解决方案尝试没有紫色红色形式，瓷托盘溶液的红紫色的对比度。量化缓冲溶液 ph 值为 7.0 磷酸 (0.067 M): 4.54 g 钾 dihydrophosphat (TT) 溶解在 500 毫升的水 (A)。在 500 毫升的水 (解决方案 B) 溶解 4.73 g 二钠 hydrophosphat 汗 (TT)。混合 38.9 毫升溶液 A 61.1 毫升的解决方案 B.调整 pH 到 7.0 通过添加滴解决方案 B 如果需要。流体力学解决方案: 溶解 23.7 毫克 N 还原 acetyl CoA-L-酪氨酸乙酯 (TT) (类别适当使用量化胰凝乳蛋白酶) 在大约 50 毫升的磷酸缓冲溶液 ph 值为 7.0 的温暖。为了冷却，添加磷酸盐缓冲溶液 ph 值 7.0 100 毫升就足够。注意: 可以冷冻的体液和物质使用解冻后，但必须在酿造后立即冻结。解决方案: 精确称取数量的适当的筹备工作 (W) 和 hydrocloric 酸可溶性 0.0012 N 解有浓度从 12 16 单位的胰凝乳蛋白酶。 在 1 毫升。 使用水溶液浓度更低或更高，如果需要所以吸光度发生质的变化的过程中，范围从 0.008 0.012 每 30 秒钟如何继续:热系统，以保持房间的温度由适当的紫外线光谱定量，包含量杯在 25 ± 0，1oC。之前和之后吸收测量，以确保温度不会更改 0.5 º c 确定的量杯里的温度。-完全 0.2 毫升溶液中 hydrocloric 酸 3.0 毫升溶液和 N 0.0012 有机物质进入测量杯厚 1 厘米.地方测量杯到空气中，优化设备被吸收的紫外光谱是 0.200 在 237 nm。-0.2 毫升测试解决方案精确到 1 厘米厚度测量杯，添加完全 3.0 毫升的水的有机物质，拌匀。投入的空气和紫外光谱测量吸光度的测量杯。衡量每 30 秒至少 5 分钟后的吸光度。至少一次重复同一稀释级别的实验。吸光度值的绝对值并不重要的不断下降率、 吸光度。如果吸光度下降的速度至少 3 分钟，一段未达到定义的常数重复的如果需要使用适当浓度测试解决方案。画线表演吸光度，不时采取的吸光度值做董和肆虐时间加快。在 3 分钟后，确定原型的函数内选取线性段。一个单位是积极改变吸光度的糜蛋白酶是 0.0075 每分钟在用这种方法规定的条件。计算机主动 (单位) 糜蛋白酶具有每个镁制剂按公式中:     其中包括:A1: 吸光度在范围内的线性吸收水平，第一次A2: 吸光度的线性吸收水平范围在最后一刻T: 一段时间 (分钟)，第一个和最后一个阅读之间D: 稀释水平的测试解决方案，W: 样品重量 (mg)有限的细菌感染没有沙门菌、 铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌 (13.6 13.6 附录附录)。保存在密封包装，阴凉干燥处，避光。类型的药物吸烟酵母蛋白质。